准确的术中肿瘤是成功手术结果的关键。传统技术特异性差、灵敏度低、耗时长,极大地影响了术中决策。在这里,我们报道了一种级联激活的近红外荧光(NIRF)探针IR780SS@CaP,它可以依次响应肿瘤酸度和谷胱甘肽水平升高,从而准确定位术中肿瘤。与非激活探针和单因素激活探针相比,IR780SS@CaP级联策略可以在复杂的生物环境中最大限度地减少非特异性激活和假阳性信号,提供优越的肿瘤与正常组织的比例,以促进腹部转移的描绘。直径小于1mm的小转移性病变可以通过IR780SS@CaP精确识别,并在NIRF成像指导下完全切除。本研究可为肿瘤诊断和影像引导下的肿瘤手术提供实时信息和可靠的决策支持,从而降低复发和并发症的风险,改善患者治疗效果。